ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是一種常用的免疫分析技術，用于檢測和定量樣本中的特定蛋白質(zhì)、肽或抗原。在進行ELISA試劑盒實驗時，可能會遇到一些問題，以下是常見問題和注意事項：
常見問題：
高背景值：原因可能包括試劑污染、洗滌不充分、板子質(zhì)量不佳或板子未正確封閉。
信號弱或不一致：可能是由于樣本或試劑的稀釋不當、試劑過期、實驗操作不當或試劑批次差異。
標準曲線不成線性：可能是因為標準品稀釋錯誤、試劑問題或操作過程中的誤差。
孔間差異大：可能是由于加樣不準確、混合不均勻或板子未充分振蕩。
假陽性或假陰性結果：可能是由于交叉反應、試劑污染或樣本處理不當。
注意事項：
試劑準備：
確保所有試劑在使用前都恢復到室溫。試劑應充分混合，避免沉淀。
樣本處理：
樣本應適當稀釋，避免過高濃度導致的非特異性結合。樣本應在適當?shù)臈l件下保存，避免反復凍融。
實驗操作：
加樣時使用多道移液器，確保加樣準確無誤。
避免液體濺出或交叉污染。在每個步驟之間徹底洗滌板子，以減少非特異性結合。
洗滌步驟：
使用洗滌緩沖液充分洗滌板孔，避免殘留的洗滌劑或蛋白質(zhì)干擾結果。
確保洗滌液完全瀝干。
孵育條件：
遵循試劑盒推薦的孵育溫度和時間。使用封板膜或鋁箔覆蓋板子，避免蒸發(fā)和污染。
底物和終止：
在加入底物后，按照推薦的時間進行反應，避免過短或過長的孵育時間。使用推薦的終止液及時終止反應。
讀板：
使用適當?shù)淖x板器，并在推薦的波長下讀取吸光度。確保讀板器校準準確。
質(zhì)量控制：
包括陰性對照和陽性對照，以驗證實驗的有效性。定期檢查試劑的有效性和批次一致性。
記錄和重復：
記錄所有實驗步驟和結果，以便于分析和重復實驗。為了確保結果的可靠性，應進行重復實驗